Käänteisviritteisten nanopartikkelileimojen käyttö homogeenisessa kilpailemattomassa immunomäärityksessä
Korpi, Krista (2017-06-20)
Käänteisviritteisten nanopartikkelileimojen käyttö homogeenisessa kilpailemattomassa immunomäärityksessä
Korpi, Krista
(20.06.2017)
Tätä artikkelia/julkaisua ei ole tallennettu UTUPubiin. Julkaisun tiedoissa voi kuitenkin olla linkki toisaalle tallennettuun artikkeliin / julkaisuun.
Turun yliopisto
Kuvaus
Siirretty Doriasta
Tiivistelmä
Käänteisviritteiset nanopartikkelileimat (engl. up-converting nanoparticles, UCNP) ovat lantanidi-ioneja sisältäviä nanokiteisiä partikkeleita, jotka virittyvät infrapuna- aallonpituusalueella ja emittoivat korkeampienergistä näkyvää valoa. Käytettäessä UCNP:itä leimana immunomäärityksissä näytemateriaali ei aiheuta taustasignaalia, koska biologisissa materiaaleissa ei esiinny vastaavanlaista käänteisvirittymistä. Lisäksi UCNP:iden etuihin leimateknologiana lukeutuvat kapeat emissiopiikit ja suuri käänteis-Stokesin siirtymä, jotka muun muassa mahdollistavat emissiovalon erottelun viritysvalosta. UCNP:itä voidaan käyttää homogeenisissa määrityksissä energian luovuttajina käänteisviritteistä resonoivaa energiansiirtoa (engl. up-conversion resonance energy transfer, UC-RET) hyödynnettäessä. UC-RET:issä luovuttajana toimiva UCNP virittää vastaanottajana toimivan pienvärin, jos niiden välinen etäisyys on keskimäärin alle 10 nm.
Työn tarkoituksena oli evaluoida asiakastoimeksiantona mahdollisuutta toteuttaa asiakkaan immunomääritys homogeenisena kilpailemattomana UC-RET -määrityksenä. Asiakkaan määrityksessä UC-RET:in onnistumiseksi määrityskompleksiin osallistuvat vasta-aineet oli valittu niiden epitooppien perusteella siten, että vastaanottaja tulisi määrityskompleksin muodostuessa lähelle UCNP:n pintaa. Evaluointia varten UCNP:t pinnoitettiin, niiden pintaan konjugoitiin analyytin tunnistavia vasta-aineita ja sekä UCNP-konjugaattien toimivuus että määrityskompleksin kyky muodostua varmistettiin heterogeenisella määrityksellä. Homogeenista määritystä optimoitiin muun muassa määrityskomponenttien ja niiden pitoisuuksien sekä määritystavan suhteen.
Analyytin tunnistavasta biotinyloidusta vasta-aineesta ja R-fykoerytriinillä leimatusta streptavidiinista koostuvalla vastaanottajakompleksilla työn UC-RET -määrityksen toiminta saatiin osoitettua. Signaali-tausta -suhteet jäivät kuitenkin alhaisiksi eikä asiakkaan asettamaa erotuskykytavoitetta saavutettu tämän diplomityön puitteissa. Määritystä olisi kuitenkin mahdollista kehittää laajempia optimointeja suorittamalla.
Työn tarkoituksena oli evaluoida asiakastoimeksiantona mahdollisuutta toteuttaa asiakkaan immunomääritys homogeenisena kilpailemattomana UC-RET -määrityksenä. Asiakkaan määrityksessä UC-RET:in onnistumiseksi määrityskompleksiin osallistuvat vasta-aineet oli valittu niiden epitooppien perusteella siten, että vastaanottaja tulisi määrityskompleksin muodostuessa lähelle UCNP:n pintaa. Evaluointia varten UCNP:t pinnoitettiin, niiden pintaan konjugoitiin analyytin tunnistavia vasta-aineita ja sekä UCNP-konjugaattien toimivuus että määrityskompleksin kyky muodostua varmistettiin heterogeenisella määrityksellä. Homogeenista määritystä optimoitiin muun muassa määrityskomponenttien ja niiden pitoisuuksien sekä määritystavan suhteen.
Analyytin tunnistavasta biotinyloidusta vasta-aineesta ja R-fykoerytriinillä leimatusta streptavidiinista koostuvalla vastaanottajakompleksilla työn UC-RET -määrityksen toiminta saatiin osoitettua. Signaali-tausta -suhteet jäivät kuitenkin alhaisiksi eikä asiakkaan asettamaa erotuskykytavoitetta saavutettu tämän diplomityön puitteissa. Määritystä olisi kuitenkin mahdollista kehittää laajempia optimointeja suorittamalla.