Nukleotidien HPLC-ESI-MS -analyysimenetelmät
Nieminen, Anu (2018-11-27)
Nukleotidien HPLC-ESI-MS -analyysimenetelmät
(27.11.2018)
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
suljettu
Julkaisun pysyvä osoite on:
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2018121150443
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2018121150443
Tiivistelmä
Nukleotidit koostuvat emäksestä, pentoosisokerista sekä yhdestä tai useammasta fosfaattiryhmästä. Nukleotidit ovat nukleiinihappojen rakenneosia. Lisäksi ne osallistuvat muun muassa solujen energiatalouteen ja toimivat entsyymeinä sekä viestimolekyyleinä elimistön eri reaktioissa. Tutkielman kirjallisessa osassa käsitellään nukleotidien kvantitatiivista analyysia käyttäen HPLC-ESI-MS ¬laitteistoa. Laitteisto on korkean erotuskyvyn nestekromatografi yhdistettynä massaspektrometriin sähkösumutusionisaatioliitännällä.
Kirjallisuusosassa esitellään laitteistoa yleisesti ja pohditaan miten nukleotideja pystytään tutkimaan eri menetelmin. Tarkastelun kohteena on menetelmiä, joissa analysoidaan eri näytteistä vain nukleotideja, mutta myös tutkimuksia, joissa näytteestä analysoidaan samanaikaisesti nukleotidien lisäksi paljon muitakin aineenvaihdunnan tuotteita. Kirjallisuusosassa käsitellään myös näiden HPLC-ESI-MS ¬menetelmien onnistumista tiettyjen kansainvälisten standardien avulla. Näin voidaan mitata menetelmänkehityksen onnistumista.
Työn kokeellisessa osuudessa selvitettiin kineettisten mittausten avulla syntetisoitujen dinukleotidianalogien hydrolyyttistä pysyvyyttä. Työn tavoitteena oli selvittää yhdisteiden reaktionopeudet sekä pilkkoutumisreitit eri pH-olosuhteissa käyttäen muun muassa HPLC-ESI-MS ¬laitteistoa. Kokeellinen osuus on osa kansainvälistä tutkimusta, jossa tarkoituksena on selvittää näiden dinukleotidianalogien potentiaalia entsyymi-inhibiittorina esimerkiksi bakteerilääkkeissä. Sopivan analyysimenetelmän löytäminen nukleotideille erilaisissa tutkimusasetelmissa on ensiarvoisen tärkeää, jotta voidaan nopeasti ja vaivattomasti tunnistaa näitä monessa toiminnassa mukana olevia tärkeitä metaboliitteja.
Kirjallisuusosassa esitellään laitteistoa yleisesti ja pohditaan miten nukleotideja pystytään tutkimaan eri menetelmin. Tarkastelun kohteena on menetelmiä, joissa analysoidaan eri näytteistä vain nukleotideja, mutta myös tutkimuksia, joissa näytteestä analysoidaan samanaikaisesti nukleotidien lisäksi paljon muitakin aineenvaihdunnan tuotteita. Kirjallisuusosassa käsitellään myös näiden HPLC-ESI-MS ¬menetelmien onnistumista tiettyjen kansainvälisten standardien avulla. Näin voidaan mitata menetelmänkehityksen onnistumista.
Työn kokeellisessa osuudessa selvitettiin kineettisten mittausten avulla syntetisoitujen dinukleotidianalogien hydrolyyttistä pysyvyyttä. Työn tavoitteena oli selvittää yhdisteiden reaktionopeudet sekä pilkkoutumisreitit eri pH-olosuhteissa käyttäen muun muassa HPLC-ESI-MS ¬laitteistoa. Kokeellinen osuus on osa kansainvälistä tutkimusta, jossa tarkoituksena on selvittää näiden dinukleotidianalogien potentiaalia entsyymi-inhibiittorina esimerkiksi bakteerilääkkeissä. Sopivan analyysimenetelmän löytäminen nukleotideille erilaisissa tutkimusasetelmissa on ensiarvoisen tärkeää, jotta voidaan nopeasti ja vaivattomasti tunnistaa näitä monessa toiminnassa mukana olevia tärkeitä metaboliitteja.